Uus koroonaviiruse (SARS-Cov-2) nukleiinhapete tuvastamise komplekt
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Flumaagiscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Uus koroonaviiruse (SARS-Cov-2) nukleiinhapete tuvastamise komplekt (fluorestseeruva RT-PCR-sondi meetod)
【Packaging specifications 】25 testi/komplekt
【Intended usvanus】
Seda komplekti kasutatakse uue koroonaviiruse nukleiinhappe kvalitatiivseks tuvastamiseks nina-neelu tampooni, orofarüngeaalse (kõri) tampooni, nina eesmise tampooni, keskmise turbinaadi tampooni, ninaloputusvedeliku ja ninaaspiraatide puhul inimestelt, kelle tervises kahtlustatakse COVID19. Uue koroonaviiruse ORF1ab ja N geenide tuvastamist saab kasutada uue koroonaviiruse nakkuse abidiagnostikaks ja epidemioloogiliseks monitooringuks.
【Principles of the proosdure 】
See komplekt on mõeldud spetsiifiliste TaqMani sondide ja spetsiifiliste praimerite jaoks, mis on loodud uudse koroonaviiruse (SARS-Cov-2) ORF1ab ja N geenijärjestuste jaoks. PCR reaktsioonilahus sisaldab 3 komplekti spetsiifilisi praimereid ja fluorestseeruvaid sonde sihtmärkide spetsiifiliseks tuvastamiseks ning komplekti sisemise standardkontrollina kasutatakse endogeensete majapidamisgeenide tuvastamiseks täiendavat spetsiifiliste praimerite ja fluorestsentssondide komplekti.
Testimise põhimõte seisneb selles, et spetsiifilist fluorestseeruvat sondi seeditakse ja lagundatakse PCR-reaktsioonis Taq ensüümi eksonukleaasi aktiivsusega, nii et reporterfluorestseeruv rühm ja kustutatud fluorestsentsrühm eraldatakse, nii et fluorestsentsi jälgimissüsteem saab fluorestsentsi vastu võtta. signaali ja seejärel PCR amplifikatsiooni rikastava efekti kaudu jõuab sondi fluorestsentssignaal määratud läviväärtuseni - Ct väärtuseni (tsükli lävi). Siht-amplikoni puudumisel on sondi reporterrühm summutusrühma lähedal. Sel ajal toimub fluorestsentsresonantsi energiaülekanne ja reporterrühma fluorestsentsi kustutab summutusrühm, nii et fluorestsentssignaali ei saa fluorestsents-PCR-seade tuvastada.
Reaktiivide kasutamise jälgimiseks testi ajal on komplekt varustatud positiivsete ja negatiivsete kontrollidega: positiivne kontroll sisaldab sihtkoha rekombinantset plasmiidi ja negatiivne kontroll on destilleeritud vesi, mida kasutatakse keskkonnareostuse jälgimiseks. Testimisel on soovitatav määrata positiivne ja negatiivne kontroll üheaegselt.
【Main components 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Komponents | |
| Name | Speckinnitamine | Kvantsuse | Kvantsuse | |
| Positiivne kontroll | 180 μL/viaal | 1 | 1 | Kunstlikult konstrueeritud plasmiidid, destilleeritud vesi |
| Negatiivne kontroll | 180 μL/viaal | 1 | 1 | Destilleeritud vesi |
| SARS-Cov-2 segu | 358,5 μL/viaal | 1 | / | Spetsiifilised praimeripaarid, spetsiifilised tuvastamise fluorestseeruvad sondid, dNTP-d, MgCl2, KCl, Tris-Hcl, destilleeritud vesi jne |
| Ensüümi segu | 16,5 μL/viaal | 1 | / | Taq ensüümid, pöördtranskriptaas, UNG ensüümid jne. |
| SARS-Cov-2 segu (lüofiliseeritud) | 25 testi/viaalis | / | 1 | Spetsiifilised praimeripaarid, spetsiifilised tuvastamise fluorestseeruvad sondid, dNTP-d, Taq ensüümid, pöördtranskriptaas, destilleeritud vesi jne. |
| 2x puhver | 375 μL/viaal | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, destilleeritud vesi jne. |
Märkus:(1) Erinevates partiikomplektides olevaid komponente ei saa segada ega omavahel vahetada.
(2) Valmistage ette oma reaktiiv: nukleiinhappe ekstraheerimise komplekt.
【Storage conditions ja expiration date 】
For BST-SARS-25:Transportida ja hoida pikka aega temperatuuril -20±5 ℃.
For BST-SARS-DR-25:Transport toatemperatuuril. Hoida pikka aega temperatuuril -20±5 ℃.
Vältige korduvaid külmutamise-sulatamise tsükleid. Kehtivusaeg on esialgselt määratud 12 kuud.
Tootmis- ja kasutuskuupäeva leiate etiketilt.
Pärast esmast avamist võib reaktiivi hoida temperatuuril -20±5 °C kuni 1 kuu või kuni reaktiiviperioodi lõpuni, olenevalt sellest, kumb kuupäev saabub varem, et vältida korduvaid külmutamise-sulatamise tsükleid ja reaktiivi külmumiskordade arvu. -sulatamistsüklid ei tohiks ületada 6 korda.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. Rakendatav proovitüüp: ekstraheeritud nukleiinhappelahus.
2. Proovide säilitamine ja transport: Hoida temperatuuril -20±5 ℃ 6 kuud. Proove külmutada ja sulatada mitte rohkem kui 6 korda.
【Testing method】
1.Nucleic acid extraction
Valige viiruse nukleiinhappe ekstraheerimiseks sobiv nukleiinhappe ekstraheerimise komplekt ja järgige vastava komplekti juhiseid. Soovitatav on kasutada Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. toodetud nukleiinhapete ekstraheerimise ja puhastamise komplekti või samaväärset nukleiinhapete puhastuskomplekti.
2. Reaction reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
(1) Eemaldage SARS-Cov-2 segu ja ensüümi segu, sulatage täielikult toatemperatuuril, segage hoolikalt Vortexi seadmega ja seejärel tsentrifuugige korraks.
(2) 16,5 uL ensüümi segu lisati 358,5 uL SARS-Cov-2 segule ja segati segatud reaktsioonilahuse saamiseks põhjalikult.
(3) Valmistage ette puhas 0,2 ml PCR oktaaltuub ja märkige see 15 uL ülaltoodud segatud reaktsioonilahusega süvendi kohta.
(4) Lisage 15 μL puhastatud nukleiinhappelahust, positiivne kontroll ja negatiivne kontroll ning katke ettevaatlikult oktaaltuubi kork.
(5) Segage hästi, pöörates tagurpidi, ja tsentrifuugige kiiresti, et vedelik kontsentreerida katseklaasi põhja.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) Lisage reaktsioonisegu ettevalmistamiseks SARS-Cov-2 segule ((lüofiliseeritud) 375 ul 2x puhvrit. Segage hoolikalt pipetiga ja seejärel tsentrifuugige korraks. （Kui reaktsioonisegu on valmistatud, on soovitatav hoida temperatuuril -20 ℃ pikaajaline ladustamine.)
(2) Valmistage ette puhas 0,2 ml PCR oktaaltuub ja märkige see 15 μL reaktsiooniseguga süvendi kohta.
(3) Lisage 15 μL puhastatud nukleiinhappelahust, positiivne kontroll ja negatiivne kontroll ning katke ettevaatlikult oktaaltuubi kork.
(4) Segage hästi, pöörates tagurpidi, ja tsentrifuugige kiiresti, et vedelik kontsentreerida katseklaasi põhja.
3. PCR amplification (Tööseadete kohta vaadake seadme kasutusjuhendit.）
3. 1 Asetage PCR 8-toru fluorestsents-PCR-instrumendi proovikambrisse ja seadke testitav proov, positiivne kontroll ja negatiivne kontroll vastavalt laadimisjärjekorrale.
3.2 Fluorestsentsi tuvastamise kanal:
(1) ORF1ab geen valib FAM-i tuvastamiskanali (reporter: FAM, kustutaja: puudub).
(2) N geen valib VIC tuvastamiskanali (reporter: VIC, kustutaja: puudub).
(3) Sisemine standardgeen valib CY5 tuvastamiskanali (reporter: CY5, kustutaja: puudub).
(4) Passiivne viide on seatud väärtusele ROX.
3.3 PCR programmi parameetrite seadistus:
| Samm | Temperatuur (℃) | Aeg | Tsüklite arv | |
| 1 | Pöördtranskriptsiooni reaktsioon | 50 | 15 min | 1 |
| 2 | Taq ensüümi aktiveerimine | 95 | 2,5 min | 1 |
| 3 | Taq ensüümi aktiveerimine | 93 | 10 s | 43 |
| Lõõmutamise pikendamine ja fluorestsentsi omandamine | 55 | 30 s | ||
Pärast seadistamist salvestage fail ja käivitage reaktsiooniprogramm.
4.Results analysis
Pärast programmi lõppu salvestatakse tulemused automaatselt ja analüüsitakse võimenduskõverat. Võimenduskõver on seatud instrumendi vaikeläviväärtusele.
【Explanation of test results 】
1. Määrake katse kehtivus: positiivse kontrolli FAM, VIC kanalil peaks olema tüüpiline amplifikatsioonikõver ja Ct väärtus on üldiselt väiksem kui 34, kuid võib kõikuda erinevate instrumentide erinevate läve seadistuste tõttu. Negatiivse kontrolli FAM, VIC kanal peaks olema võimendamata Ct. Lepitakse kokku, et ülaltoodud nõuded peavad olema täidetud samaaegselt, vastasel juhul on see test kehtetu.
2. Tulemuslik otsus
| FAM/VIC kanal | Kohtuotsuse tulemus |
| Ct＜37 | Proovi test on positiivne |
| 37≤Ct＜40 | Amplifikatsioonikõver on S-kujuline ja kahtlased proovid tuleb uuesti uurida; kui korduseksami tulemused on järjepidevad, hinnatakse see positiivseks, vastasel juhul negatiivseks |
| Ct≥40 või võimendus puudub | Proovi test on negatiivne (või alla komplekti tuvastamise alampiiri) |
Märkus. (1) Kui nii FAM-kanal kui ka VIC-kanal on samaaegselt positiivsed, määratakse SARS-Cov-2 positiivseks.
(2) Kui FAM-kanal või VIC-kanal on positiivne ja teine kanal on negatiivne, tuleks testi korrata. Kui see on samal ajal positiivne, hinnatakse seda SARS-Cov-2 positiivseks, vastasel juhul hinnatakse seda SARS-Cov-2 negatiivseks.
Seotud tooted
-
COVID-19 IgM/IgG antikehade tuvastamise komplekt
COVID-19 IgM/IgG antikehade tuvastamise komplekt (kolloidse kullaga immunokromatograafia meetod) tootejuhend 【TOOTE NIMETUS】COVID-19 IgM/IgG antikehade tuvastamise komplekt (kolloidse kulla immunokromatograafia meetod) 】TESTID 】 PAKENDID, 1. 【 KOKKUVÕTE】 Uued koroonaviirused kuuluvad perekonda β. COVID-19 on äge hingamisteede nakkushaigus. Inimesed on üldiselt vastuvõtlikud. Praegu on uudse koroonaviirusega nakatunud patsiendid peamiseks allikaks...
-
Nukleiinhapete ekstraheerimise või puhastamise komplekt
Nukleiinhapete ekstraheerimise või puhastamise komplekt või hoitakse temperatuuril -20 ℃. Proovi tuleks transportida kasutades 0 ℃ koolutamist. Sissejuhatus Nukleiinhappe ekstraheerimise või puhastamise komplekt (magnethelmeste meetod) on ette nähtud RNA ja DNA automaatseks puhastamiseks kehavedelikest (nt tampoonid, plasma, seerum), kasutades nukleiinhappe ekstraheerimise automatiseeritud instrumente. Magnetosakeste tehnoloogia tagab kvaliteetse DNA/RNA, mis sobib ...
-
SARS-CoV-2 antigeeni analüüsi komplekt (immunokromatogr...
SARS-CoV-2 antigeenianalüüsi komplekt (immunokromatograafia meetod) toote käsiraamat 【TOOTE NIMETUS】SARS-CoV-2 antigeenianalüüsi komplekt （immunokromatograafia meetod) 【PAKENDI SPETSIFIKATSIOONID】 1 TestABESSTRACT kuulub viirusele. COVID-19 on äge hingamisteede nakkushaigus. Inimesed on üldiselt vastuvõtlikud. Praegu on uudse koroonaviirusega nakatunud patsiendid peamised...
-
SARS-CoV-2 antigeenianalüüsi komplekt
SARS-CoV-2 antigeenianalüüsi komplekt (immunokromatograafia meetod) toote käsiraamat 【TOOTE NIMETUS】SARS-CoV-2 antigeenianalüüsi komplekt (immunokromatograafia meetod) 【PAKENDI SPETSIFIKATSIOONID】 1 Test/Kit/Kit/Kit/Kitts1, TRAKTITEST ,0KTTESTS 】 Uued koroonaviirused kuuluvad β perekonda. COVID-19 on äge hingamisteede nakkushaigus. Inimesed on üldiselt vastuvõtlikud. Praegu on uudse koroonaviirusega nakatunud patsiendid peamine nakkusallikas; asümptomaatilised nakatunud inimesed...